Питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, сухая.
ВФС 42-2881-97
Препарат защищен патентом N 1730143.
ХАРАКТЕРИСТИКА
Питательная среда предназначена для выделения возбудителя туляремии из инфицированного материала от животных и объектов внешней среды, а также для культивирования музейных штаммов или свежевыделенных чистых культур.
Питательная среда выпускается в виде комплекта, состоящего из рыбносолевого агара (РСА), глюкозо-витаминной добавки (ГВД) и селективной добавки (СД). По согласованию с заказчиком для культивирования возможна поставка без селективной добавки.
РСА представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-коричневого цвета, растворимый в воде при кипячении в течение 2-3 мин.
ГВД - порошок белого цвета, хорошо растворимый в воде.
СД - порошок светло-желтого цвета
СОСТАВ, Г/Л
РСА
Сернокислотный гидролизат рыбной муки, марки ФКС
17,0
Стимулятор роста гемофильных микроорганизмов
5,0
Экстракт пекарных дрожжей
2,3
Магний cульфат
0,5
Натрий сульфит
0,7
L-цистеин
0,5
Агар
10,0±2,0
ГВД
Глюкоза
6,0
Тиамин хлорид
0,008
Кальций пантотенат
0,008
СД
Кефзол или цефалексин
0,02
Амфотерицин В или амфоглюкамин
0,01 или 0,07 соответств
Ристомицин сульфат
0,04
рН готовой среды
7,0±0,2
ПРИГОТОВЛЕНИЕ
Взвешивают РСА в количестве, указанном на этикетке (36,0±2,0 г). Навеску размешивают в 970 мл дистиллированной воды и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин. Стерильный раствор РСА охлаждают до температуры 45-50 °С.
Взвешивают 6,02 г ГВД, навеску растворяют в 20 мл дистиллированной воды и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при температуре 110 °С.
Взвешивают СД в количестве 0,07 г (смесь кефзол (цефалексин) + амфотерицин В + ристомицин-сульфат) или 0,13 г (смесь кефзол (цефалексин) + амфоглюкамин + ристомицина сульфат), добавляют 10 мл дистиллированной воды и растворяют при тщательном перемешивании.
4. В колбу со стерильным раствором РСА, охлажденным до температуры 45-50 °С, асептически вносят стерильный раствор ГВД, тщательно перемешивают , добавляют раствор СД, снова тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
При приготовлении среды для культивирования допускается селективную добавку не вносить.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Тест-штамм
Инокулят
Инкубация
Наблюдаемый эффект
Francisella tularensis 503
по 0,1 мл из разведения 10-7 (100 м.к/мл)
72ч 36-38°С
Рост единичных беловато- серых блестящих колоний диаметром не менее 1 мм. Атипичных колоний не допускается.
Francisella tularensis A.Cole
Francisella tularensis 120
Escherichia coli ATCC 25922
0,1 мл из разведения 10-4 (105 м.к/мл)
72ч 36-38°С
Полное отсутствие роста
Proteus vulgaris X19M 3137
0,1 мл из разведения 10-4 (105 м.к/мл)
72ч 36-38 °С
Полное отсутствие роста
Staphylococcus aureus ATCC 25923
0,1 мл из разведения 10-4 (105 м.к/мл)
72ч 36-38 °С
Полное отсутствие роста
Bacillus cereus АТСС 10702
0,1 мл из разведения 10-4 (105 м.к/мл)
72ч 36-38 °С
Полное отсутствие роста
ПОСЕВ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Посев и учет результатов проводят в соответствии с "Методическими указаниями по лабораторным методам диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов туляремии"/МЗ СССР.- Москва, 1983 и "Инструкцией по лабораторной диагностике туляремии у людей"/МЗ СССР. - Москва, 1981.-26 с.
Инокулятом засевают 3 чашки Петри, распределяя его по поверхности среды, и инкубируют их при температуре 36-38 °С. Через 72 ч инкубации на чашках наблюдаются типичные колонии Francisella tularensis диаметром не менее 1 мм. Рост микробов-ассоциантов подавляется. Возможно наличие 1-2 колоний микробов-сапрофитов, не мешающих росту туляремийного микроба.
