Питательная среда для определения токсигенности дифтерийных микробов, сухая.
ВФС 42-2855-97
ХАРАКТЕРИСТИКА
Коринетоксагар предназначен для определения токсигенности дифтерийных микробов методом диффузионной преципитации в студне среды.
Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.
СОСТАВ ОСНОВЫ, Г/Л
Панкреатический гидролизат минтая
20,0
Натрий хлорид
5,0
Натрий карбонат
0,6±0,1
Агар
10,0±2,0
рН готовой среды
7,8±0,2
ПРИГОТОВЛЕНИЕ
Препарат в количестве, указанном на этикетке (35,6±2,0 г), размешивают в 1 л дистиллированной воды и кипятят 2-3 мин до полного расплавления агара.
Среду разливают по 17 мл в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 30 мин.
Пробирки со средой после стерилизации охлаждают до температуры 40-50 °С, вносят в каждую по 3 мл сыворотки крови крупного рогатого скота или нормальной лошадиной сыворотки, тщательно перемешивают и переливают в стерильные чашки Петри. При необходимости приготовления большого объема коринетоксагара среду разливают в соответствующие емкости, измеряя при этом ее объем, стерилизуют, охлаждают и добавляют соответствующее количество сыворотки. После этого среду разливают в стерильные чашки Петри.
На середину каждой чашки Петри с застывшей средой стерильным пинцетом помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, смоченную раствором диагностического дифтерийного антитоксина.
Для приготовления полосок, фильтровальную бумагу (80x15 мм) заворачивают в бумажные пакетики из оберточной бумаги по три штуки и стерилизуют в течение 30 мин автоклавированием при 121 °С. Содержимое ампулы с диагностическим дифтерийным антитоксином (500 МЕ), очищенным ферментолизом и специфической сорбцией, растворяют в 1 мл стерильного 0,9 %-го раствора хлорида натрия. Полученного раствора достаточно для смачивания четырех полосок (0,25 мл на полоску). Стерильные полоски обожженным пинцетом переносят в стерильную чашку Петри и смачивают полученным раствором дифтерийного антитоксина.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Тест-штамм
Инокулят
Наблюдаемый эффект
Corynebacterium diphtheriae gravis 665
По одной бак. петле диам. 2 мм засеивают на три чашки Петри в виде "бляшек" диаметром 5-7 мм по обе стороны от полоски фильтровальной бумаги на расстоянии 5 мм друг от друга и от края бумажки
При температуре 36-38°С:
Через 22-24 ч при просмотре посевв под лупой в проходящем свете на темном фоненаблюдаются линии преципитации
Через 44-48 ч линии преципитации становятся компактнее и видны невооруженным глазом
По одной бак. петле диам. 2 мм распределяют в виде "бляшек" диаметром 5-7 мм по обе стороны от полоски фильтровальной бумаги на расстоянии 5 мм друг от друга и от края бумажки
Чистую культуру коринебактерий, полученную со среды выделения (например, с коринебакагара), засевают на три чашки в количестве одной бактериологической петли диаметром 2 мм в виде "бляшек" диаметром 5-7 мм по обе стороны полоски фильтровальной бумаги, смоченной раствором дифтерийного антитоксина, на расстоянии 5 мм друг от друга и от края бумаги. Контролем служит заведомо токсигенный штамм, который засевают между испытуемыми культурами.
Первичный учет проводят через 24 ч инкубации при температуре 36-38 °С, просматривая посевы через лупу в проходящем свете на темном фоне. В среде формируется одна четкая линия преципитации напротив токсигенной культуры. Нетоксигенные культуры следов преципитации не обнаруживают.
СРОК ГОДНОСТИ
сухой среды:
2 года при температуре от 2 до 30 °С
готовой среды:
14 суток без внесения сыворотки при температуре 2-8 °С или 5 суток с сывороткой при температуре 2-8 °С
